常見的RNA提取的方法：傳統(tǒng)的酚CHCl?抽提法和柱式抽提法。

操作流程概要

酚CHCl?抽提法

以 Vazyme 產(chǎn)品 RNA isolater Total RNA Extraction Reagent (Vazyme #R401) 為例

自備材料

CHCl?，異丙醇，75% 乙醇 (DEPC 水配制 )，DEPC 水

組分

                                                                                                                                                                                                         

樣本制備（過多的樣本量可能會導(dǎo)致樣本裂解不充分，并使產(chǎn)物純度降低；）

1ml RNA is olater 能夠充分裂解的最大樣本量如下：                                                                                                                                                                                                                                                                  

貼壁細(xì)胞（對于貼壁牢固的細(xì)胞可用細(xì)胞刮勺剝離細(xì)胞）

1.棄培養(yǎng)液，PBS 洗滌一次。

2.每 10 cm2 培養(yǎng)面積的細(xì)胞加入 1-3 ml RNA isolater，使之充分覆蓋到細(xì)胞表面，

然后用移液器將細(xì)胞吹打下來。

3.將裂解液轉(zhuǎn)移至 1.5 ml 離心管中，用移液器反復(fù)吹打直至無明顯顆粒樣存在。

冰上靜置 5 min

懸浮細(xì)胞

1、離心收集細(xì)胞，PBS 洗滌一次。

2、每 5 ⅹ 106 -107 個細(xì)胞加入 1 ml RNA isolater。

3、用移液器反復(fù)吹打直至無明顯顆粒樣存在。冰上靜置 5 min。

動物組織

液氮研磨（部分研磨會影響 RNA 的得率和質(zhì)量）：

1、將液氮研磨的粉末立即轉(zhuǎn)移至離心管中，加入 RNA isolater 裂解液，靜置。待樣品全部融化后，再繼續(xù)吹打至裂解液透明。

2、將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管中，12,000 × g 4℃離心 5 min，吸取上清。

勻漿處理：

1、可將新鮮組織盡量剪碎浸泡在 RNA isolater 裂解液中，用電動勻漿器高速勻漿，將組織全部研磨均勻。

2、將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管中，12,000 × g 4℃離心 5 min，吸取上清。

提取流程        
                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                   

柱式抽提法

以 Vazyme 產(chǎn)品 FastPureTM Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit (Vazyme #RC101/RC111) 為例

自備材料

組分

β- 巰基乙醇、無水乙醇、RNase-free 槍頭等。

培養(yǎng)細(xì)胞

貼壁細(xì)胞：

無需消化，可直接使用 Buffer RL1( 已加入 β- 巰基乙醇 ) 進(jìn)行消化、裂解；或用胰酶消化后離心收集細(xì)胞加入 Buffer RL1( 已加入 β- 巰基乙醇 )，每 2-5×106 個細(xì)胞加入 500 μl Buffer RL1。用移液器反復(fù)吹打混勻直至看不到細(xì)胞團(tuán)塊。（使用前在 Buffer RL1 加入 β- 巰基乙醇至終濃度為 1%（如1 ml Buffer RL1 中加入 10 μl β- 巰基乙醇），盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）

懸浮細(xì)胞：

直接離心收集細(xì)胞，加入 Buffer RL1( 已加入 β- 巰基乙醇 )，每 2-5×106 個細(xì)胞加入 500 μl Buffer RL1，用移液器反復(fù)吹打混勻直至看不見細(xì)胞團(tuán)塊。（每 2-5×106 個細(xì)胞加入 500 μl Buffer RL1，細(xì)胞裂解完后若不立即進(jìn)行下一步操作，可以置于 -70℃、保存）

提取流程

相關(guān)產(chǎn)品

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)?？梢栽诘谝粫r間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務(wù)